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細胞培養的無菌環境-無菌室和超凈工作臺

更新時間:2022-06-07  |  點擊率:1529

一、無菌室

無菌室的結構:一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。

無菌室的消毒和防污染:為保持無菌狀態,經常消毒是必要的,通常采用每日(使用前)紫外照射(1-2小時),每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸(2小時)和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進行消毒。實際工作中,要根據無菌室建筑材料的差異來選擇合適的消毒方法。

此外,還應注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括:送入無菌室的風沒有被過濾除菌;進出無菌室時,能使外界空氣直接對流進無菌室的操作間;等。

二、超凈工作臺

工作原理:鼓風機驅動空氣通過高效過濾器得以凈化,凈化的空氣被徐徐吹過臺面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走,使工作區構成無菌環境。根據氣流在超凈工作臺的流動方向不同,可將超凈工作臺分為側流式、直流式和外流式三種類型。

超凈臺的使用與保養:超凈臺的平均風速保持在0.32-0.48米/秒為宜,過大、過小均不利于保持凈化度;使用前最好開啟超凈臺內紫外燈照射10-30分鐘,然后讓超凈臺預工作10-15分鐘,以除去臭氧和使用工作臺面空間呈凈化狀態;使用完畢后,要用70%酒精將臺面和臺內四周擦拭干凈,以保證超凈臺無菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈臺。

細胞間發生支原體污染的風險較高,因為人、試劑、細胞株都可攜帶支原體。下面,筆者從預防的角度,對降低支原體污染風險提供一些建議,供參考。

1. 預防人源攜帶的支原體

1)應帶帽子、口罩、手套、白大褂,應預防個人攜帶的支原體飄散到空氣中,同時應注意個人衛生。

2)在超凈臺上操作,必要時打開酒精燈。

3)操作時盡量不說話。

2. 預防環境中的支原體

可使用德國MB公司的支原體祛除噴霧Mycoplasma Off™或濕巾Mycoplasma Off™ Wipe。該祛除劑中含有殺滅支原體的Mynox®成分。也能消除細菌、真菌和一些病毒。應定期對環境進行清潔消毒。

細胞培養的無菌環境-無菌室和超凈工作臺


還可用支原體祛除噴霧對移液器進行消毒。

3. 避免物品或試劑帶來的支原體污染

吸量管等實驗室耗材如果為反復使用,應保證充分高壓滅菌。

應對培養基、細胞等定期進行檢測支原體,防止它們成為支原體的污染源。

4. 細胞培養箱、水浴鍋等進行支原體的污染和祛除

可使用德國MB公司的支原體祛除劑(水槽用)Water Shield(TM)


如果注意以上因素并采取一定的預防措施,相信一定能使細胞被支原體污染的風險降至很低,祝您順利!


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